前一階段花費了不少時間,來摸索體(ti) 外BBB的構建方法,試了三種Transwell板,試用了2-3台細胞電阻儀(yi) ,也換了不同課題組的細胞,功夫不負有心人,終於(yu) 構建成功拿到了理想結果。 當初在摸索階段從(cong) 小紅書(shu) 上也獲得很多靈感,也感激給予幫助不吝賜教的朋友們(men) ,因此借總結一些經驗,分享出來,希望友友們(men) 少走彎路。
1、細胞狀態很重要!一定要等到細胞狀態良好時再種板,上室小孔膜上鋪5W個(ge) 細胞,種板要均勻,上室100-200μL完培,下室600-800μL完培。
2、不要汙染!由於(yu) 種Transwell板比較複雜,工序多,要時刻注意消毒。種完板後,不用一直鏡下觀察;使用電阻儀(yi) 檢測室,更要注意不要汙染。
3、 選擇合適的Transwell板,確定自己需要多少孔的孔板,從(cong) 而知道種多少個(ge) 細胞。如果需要鏡下觀察細胞狀態的話,要用PET膜(透明的)。我當初試了甄選/康寧/潔特的,最後選了潔特的孔板。
4、選擇穩定好用的細胞電阻儀(yi) !!!這個(ge) 是重中之重,比如密理博的電阻儀(yi) ,是筷子電極,手持式的話容易抖,導致數值不穩。我選的是北京金工的RE1600上皮電壓電阻儀(yi) ,可以平穩放在孔板上,檢測的時候數值超級穩定。
5、關(guan) 於(yu) BBB形成時間,每次構建BBB的時長都要根據細胞狀態而異,要確保單層細胞形成(細胞電阻達到穩定平台期),再進行下一步實驗。
文章引用出處:體(ti) 外血腦屏障模型構建-大功已成 - 小紅書(shu) (xiaohongshu.com)
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